多發性骨髓瘤（Multiple Myeloma, MM）是一種常見于中老年人血液系統漿細胞惡性腫瘤，隨著我國人口老齡化不斷增長，MM發病率呈明顯上升趨勢。當前MM重要臨床問題是耐藥所誘導的復發難治。課題組前期發現在MM和多種腫瘤中染色體不穩定基因NEK2高表達，并與預后生存密切相關；

近日，中南大學腫瘤研究所周文教授研究團隊在Advanced Science（IF：16.8）雜志上發表了《Genetic Aberrations and Interaction of NEK2 and TP53 AccelerateAggressiveness of Multiple Myeloma》論文。本研究闡明了NEK2高表達的原因主要為DNA拷貝數增加和遠端啟動子區TP53結合位點處的甲基化所致。通過大樣本數據分析發現同時伴有NEK2高表達與TP53丟失的MM患者預后最差。體內外實驗進一步發現伴有NEK2與TP53“雙打擊”遺傳變異的MM細胞惡性增殖程度高和對藥物反應不敏感，其分子機制主要為 TP53的丟失一方面可以誘導染色體不穩定性的發生，例如NEK2所在染色體區段的擴增；另一方面可以上調DNMTs的表達，促使NEK2啟動子區域甲基化，TP53介導的轉錄抑制復合物無法結合，從而促進NEK2的表達；反之在TP53丟失的腫瘤細胞系中恢復TP53表達或干預NEK2可以減緩腫瘤細胞增殖和增強其對臨床用藥硼替佐米敏感性。該研究為緩解TP53丟失的MM及其他腫瘤患者的臨床耐藥提供了新的治療靶點。

備注：

中南大學腫瘤研究所周文研究員為論文的獨立通訊作者，中南大學湘雅公共衛生學院馮湘玲副研究員和中南大學腫瘤研究所博士生郭姣姣為文章的并列第一作者。

劃重點：

本研究中，涉及免疫共沉淀等相關實驗，使用了Biolinkedin?ProteinA/G Magnetic Beads（L-1004）。

利用H929細胞系以及H929- TP53KO細胞系，通過內源性IP檢測提示p53與DNMT1和DNMT3a相互作用，而與DNMT3b不存在相互作用。進一步表明，表明p53通過抑制DNMT的表達來保護其在NEK2啟動子中的結合區域DNA甲基化累積程度。

方法

1.      收集細胞并于裂解液中裂解，置于冰上裂解40分鐘；

2.      將裂解液分別與4 μg p53多克隆抗體和小鼠IgG抗體在旋轉器上4°C孵育過夜；

3.      將ProteinA/G Magnetic Beads（L-1004）加入上述蛋白-抗體復合物上，孵育2 h后收集免疫沉淀復合物；

4.      煮樣后WB檢測

全文：

在MM患者中NEK2的擴增與不良預后相關

NEK2在有TP53病變的MM患者中表達升高

NEK2表達與MM細胞中野生型tp53缺失呈負相關  

NEK2和p53的雙重缺陷增強了MM的有絲分裂異常、細胞增殖、凋亡和腫瘤發生  

TP53缺失通過誘導MM細胞擴增和染色體不穩定性上調了NEK2的表達

p53缺失通過間接轉錄調控促進NEK2的異常高表達

p53通過調節DNMTs的表達來抑制NEK2的表達

在p53缺失的MM細胞中下調NEK2可抑制細胞生長，降低耐藥性  

TP53調控NEK2機制示意圖

IF：16.8 I Biolinkedin?ProteinA/G Magnetic Beads 在NEK2與TP53促進多發性骨髓瘤耐藥機制中的應用

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