很多生物學實驗都需要使用抗體，例如WB、IP、IF等等，不同的實驗對于抗體的選擇是有差異的，如果抗體選擇不合理，實驗的結果將很難達到理想效果。那么IP（免疫沉淀）實驗如何選擇抗體呢？來了解一下吧

一、在IP實驗中，抗體需要通過識別抗原的構象表位并與靶蛋白結合沉淀出來，而只能識別線性表位的抗體則無法做到這一點。所以開始IP實驗之前，一定要先確定所選抗體適用于IP實驗。

以Anti-HA tag Antibody 為例

另外，一般IP和WB在抗體稀釋比上有不同，這一點也需要明確。

二、盡量選擇已發表高分文獻中經常引用的品牌以及貨號。

一般文獻中報道的品牌貨號產品已經過驗證，再結合文章中的數據，擇優選擇。

三、所選抗體與結合蛋白Protein A/G的親和力弱，無法將抗體與目的蛋白復合物沉淀下來。

由于不同物種的不同蛋白亞型與結合蛋白的親和力都不相同，選擇相應的結合蛋白才能保證實驗順利。可以根據下表來選擇與所用抗體親和力強的結合蛋白：

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如果IP所涉及目的蛋白帶有相關標簽，如Flag tag、HA tag等。那么實驗中，既可以選擇IP級別的抗體并配套相關磁珠（Protein A/G Magnetic beads），也可以直接選用相關標簽蛋白抗體磁珠，比如Biolinkedin?Anti-Flag Magnetic beads。

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如果目前所涉及抗體實在無法滿足IP實驗需要，我們也可以考慮利用鏈霉親和素-生物素系統（Streptavidin-Biotin System），將目的蛋白生物素化標記，并通過   Streptavidin Magnetic beads對目的蛋白進行免疫沉淀。

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四、Western Blot 55kD以及25kD出現條帶。

多出來的兩條，其實是IgG的重鏈和輕鏈WB實驗上樣之前，樣品一般要煮沸變性并去除Protein?A/G?beads，緩沖液中的巰基乙醇會將抗體重鏈和輕鏈之間的二硫鍵破壞，使抗體分子變成55kD的重鏈分子和25kD的輕鏈分子。

IP實驗抗體與后續用于Western Blot實驗的抗體來源種屬可以選擇不同。如果IP抗體是鼠源的，那么后續WB的抗體可以選擇兔源的。

五、單多克隆抗體的選擇。

一般單克隆抗體特異性強，背景低，親和力可能會低一點，檢測抗原靈敏度可能也會略低一點；多克隆抗體特異性一般稍弱一些，抗體的親和力強，靈敏度高，但易出現非特異性條帶。抗體是多克隆還是單克隆，一般為了特異性結合會選單克隆，但如果蛋白豐富低或其他條件條帶很難跑出來，可以買多克隆。

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